ПЛР-тестування, яке використовує полімеразну ланцюгову реакцію, – це молекулярний метод, що використовується переважно для діагностики інфекцій. Тест також проводиться для виявлення хвороби Лайма (кліщового захворювання). Завдяки здатності дублювати фрагмент ДНК, що цікавить, можливо виявити генетичний матеріал мікроорганізмів. Що таке метод ПЛР і як працює тест?
ПЛР-тестування – що це включає?
Метод ПЛР є одним з найбільш поширених молекулярних методів, який все частіше використовується в діагностиці інфекцій різної етіології. Мета ПЛР-тесту полягає у виявленні специфічного фрагмента ДНК у досліджуваному матеріалі. Щоб виявити ДНК або РНК у зразку, його необхідно ампліфікувати у кількох копіях. Це забезпечує високу чутливість методу та здатність виявляти фрагмент ДНК, що нас цікавить, навіть коли в матеріалі присутня лише слідова його кількість. В Україні зробити ПДР-діагностику можна зробити в медичному центрі Spectrolab – https://splab.com.ua/pcr-diagnostics/
Для проведення ПЛР-реакції необхідно приготувати реакційну суміш, що складається з:
- зразок, що тестується, в якому ми шукаємо генетичний матеріал;
- праймери, тобто спеціально розроблені фрагменти ДНК, комплементарні до шуканого фрагмента ДНК;
- нуклеотиди, необхідні для синтезу реплікуючої ДНК;
- ДНК-полімераза, фермент, що каталізує реакцію;
- буфер.
Суміш слід помістити в спеціальний апарат, так званий термоциклер, що забезпечує відповідні умови реакції. Необхідно підтримувати оптимальну температуру на кожному етапі реакції, яка забезпечує дуплікацію потрібного фрагмента ДНК – якщо він присутній у зразку.
ПЛР-тест можна модифікувати різними способами; Наприклад, часто використовується реакція ПЛР у реальному часі, яка дозволяє контролювати процес розмноження ДНК у режимі реального часу – все завдяки явищу флуоресценції. У випадку цього методу немає потреби робити дублікований фрагмент ДНК видимим після реакції, наприклад. використовуючи кольорові маркери.
ПЛР-тест – які інфекції він виявляє?
Метод ПЛР все частіше використовується для швидкої діагностики вірусних, бактеріальних або паразитарних інфекцій. Використання традиційних методів діагностики інфекцій, тобто посівів або клітинних культур, є трудомістким – результати отримують через кілька днів.
Однак, зазвичай використовуються серологічні методи, наприклад, метод ELISA, не завжди є достатньо точними та можуть бути схильні, наприклад, до перехресних реакцій. Однак метод ПЛР є дуже швидким, точним і чутливим. Завдяки цьому тесту можна діагностувати:
- бактеріальні інфекції (головним чином Borrelia burgdorferi – збудник хвороби Лайма, кишкова паличка, золотистий стафілокок, туберкульоз);
- метод ПЛР має особливе значення у випадку інфекцій крові, де необхідна якомога швидше діагностика;
- вірусні інфекції (ВІЛ, герпес, вірус Епштейна-Барр, віруси гепатиту, цитомегаловірус, оперізувальний лишай).
Завдяки методу ПЛР також можливо виявити паразитарні інфекції (Chlamydia trachomatis).
ПЛР-тест на рак та генетичні захворювання
ПЛР-тестування також використовується в онкологічній діагностиці, де воно дозволяє як діагностувати рак, так і моніторити багато онкологічних захворювань: лейкемію, рак легенів, рак товстої кишки, рак молочної залози.
Профілактичні тести на рак також стають дедалі важливішими – ПЛР-тестування дозволяє оцінити схильність до розвитку певних видів раку. До них належать мутації в генах BRCA1 та BRCA2, які збільшують ризик розвитку раку молочної залози, та мутації в генах APC та CHEK2, які сприяють розвитку раку шийки матки.
ПЛР – це аналіз крові, який може бути використаний для діагностики певних генетичних захворювань, а також для проведення тестів на батьківство. Також можливе використання методу ПЛР у токсикології.
ПЛР-тест – хвороба Лайма
Одним із дедалі поширеніших застосувань ПЛР є діагностика хвороби Лайма (кліщового захворювання). Хвороба Лайма стає дедалі поширенішим захворюванням, але його діагностика все ще проблематична. Виявляється, що серологічні методи, які зазвичай використовуються, мають значні обмеження. У початковий період інфекції існує так зване серологічне вікно – антитіла проти Borrelia burgdorferi неможливо виявити, оскільки організм їх ще не синтезував. Крім того, у людей з ослабленим імунітетом не синтезується достатня кількість антитіл. Метод ПЛР буде ідеально працювати в кожному випадкувиходити з цих ситуацій.
ПЛР-тестування на кліщів
Тестування на хворобу Лайма за допомогою генетичних методів може проводитися з моменту зараження. Цікаво, що можна оглянути кліща, видаленого з місця укусу. ПЛР-тестування на хворобу Лайма також чудово підходить для тих людей, у яких є симптоми інфекції хвороби Лайма, але серологічні тести дають негативні результати.
Таким чином, ПЛР-тестування є дуже точним і швидким методом. Однак важливо пам’ятати про правильний збір матеріалу для тестування. Окрім дослідження кліщів, це може включати зразок шкіри з місця укусу або місця мігруючої еритеми, а також синовіальну рідину, спинномозкову рідину, кров або сечу. Якщо пацієнт вирішить пройти ПЛР-тест на хворобу Лайма, ціна становить приблизно 200 злотих.
Метод ПЛР – процес – дослідницький матеріал
ПЛР-тестування можна проводити на багатьох біологічних матеріалах, зібраних у пацієнта. Один з найпопулярніших – це аналіз крові – пацієнту не потрібно голодувати чи робити якусь спеціальну підготовку до аналізу.
Наступним матеріалом є мазки, взяті з шийки матки, уретри, горла та носа. У таких випадках необхідно дотримуватися правил завантаження матеріалу. Сечу слід збирати вранці у стерильний контейнер, попередньо помивши статеві органи водою з милом.
Під час взяття мазків з шийки матки слід уникати використання вагінальних засобів, а під час взяття мазка з уретри рекомендується утриматися від сечовипускання протягом години перед взяттям матеріалу.
Однак не слід чистити зуби перед тим, як взяти мазок з горла. Інші матеріали, придатні для ПЛР-тестування, включають зразки шкіри, синовіальну рідину та спинномозкову рідину.